Pappenheim + Antikörper

[sternschnuppe]

Hallo,

ich habe eine Frage zu Färbungsmethoden von Zellen (hier speziell die hämatopoetischen Zellen). Ist es möglich, nachdem ich eine Pappenheimfärbung "meiner Zellen" angefertigt habe, anschließend die gleichen Zellen auf dem selben Objektträger mit PE/FITC gelabelten AK zu markieren, um im Fluoreszenzmikroskop die Subpopulation spezifischer nachweisen zu können??? Hat das eventuell schon mal jemand von euch probiert, wenn ja, wie sahen die Ergebnisse aus???
Ich hatte bereits reichlich Literaturrecherche betrieben, bin aber auf kein Ergebnis gestoßen.
Freue mich über jede Anregung und Antwort!!!
Lieben Gruß,
Sternschnuppe

[test]

Hallo auch,

ich arbeite zwar nich mit Pappenheimer Färbung, nur viel mit Immunzytochemie, ich würde aber sagen probiers aus ;-) Denke das sollte gehen.

[Froschkönig]

Leider hab ich dazu auch keine definitive Aussage parat...aber vielleicht ne Anregung:

Wenn du es nicht mit ewigem "Try and Error" versuchen willst, vielleicht gibts ja auch Veröffentlichungen einfach über den Einfluß von Färbemethoden auf die AG-Struktur der Zelloberfläche ??? (Falls Du das nicht eh schon zur Genüge abgegrast hast). Ich kann dazu keine Quellen aus dem Hut zaubern aber ich hab von irgendwo in der MikroBio noch im Hinterkopf, daß die AG-Struktur auch NACH färbung teilweise funzt...aber damit kommt man leider nicht weit :-(

Viel Glück und viele brauchbare Antworten :-)

Der Frosch

[test]

Wie ist denn die Fixiermethode bei Pappenheimer? Ist das nich luftgetrocknet? Die Fixierung verändert ja immer die AG Struktur, daher funktionieren ja auch nich alle Antikörper in der ICC, daher würde ich fast sagen es führt nix ums probieren drumrum, wie so oft in der ICC ;-)

[sternschnuppe]

Ja, Pappenheim wird luftgetrocknet. An Veränderung der Ag-Struktur hatte ich nicht bezweifelt. Ich dachte nur, vielleicht hat schon mal jemand so einen Schritt ausprobiert, hätte ja gut sein können. Das Problem ist, ich kann halt nicht zuerst den AK draufgeben, da der mir dann A) durch die ständige Lichtbelastung und B) durch zig neue Waschritte bei Pappenheimfärbung und eventuell Verdrängung aus Bindungsstelle wieder verloren geht ...
Es ist halt Forschung, viel probiert, geflucht und Geld verschwendet (AK sind nicht billig, wie ihr wisst).
Trotzdem vielen Dank für eure Antworten!!! Ich probiers aus, mal sehen, was wird! :-top
Gute Nacht,
Sternschnuppe

[test]

Naja en paar µl fürn Versuch isses wert. Ich benutz die außerdem immer wieder :-stud

[Rico]

Naja en paar µl fürn Versuch isses wert. Ich benutz die außerdem immer wieder Jaja, die Schwaben.... "Och, die sind doch noch gut, die kann man doch nochmal nehmen." :-keks

[test]

Jaja, die Schwaben.... "Och, die sind doch noch gut, die kann man doch nochmal nehmen." :-keks

bin gar kein schwabe :-)) außerdem isses ja nich nur das Geld was man spart, sondern auch die Zeit den AK anzusetzen. ;-) :-notify :-keks