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Archiv verlassen und diese Seite im Standarddesign anzeigen : dr.arbeit proteinexpression



trul
16.03.2004, 12:30
hallöchen zusammen.

gibt es irgendjemand da draussen,der sich evtl mit diesem thema auch in seiner diss auseinandersetzt??? :-((
oder jemanden kennt,oder der wieder jemanden kennt?
..wär nämlisch suuuupper.
such' jemanden,der sich mal mit mir über so ein paar versuchstechnische dinge austauscht?molekulargenetik und so...

also falls ihr nen tip habt-immer her damit!
wär echt klasse.
hänge seit 11/4jahr an den versuchen und werd u werd nicht fertig.ich weiss,dass es leute gibt die schon mehrere jahre im labor pipettieren.aber ich hab das ganze ca 5h/tag,5-6d/woche gemacht und dass über diesen zeitraum-neben uni,lernen,jobben.
hab entschieden die nase voll!!!

meldet euch.vielleicht auch nur zum zusammen jammern.. :-) .

grüssle
trul

test
16.03.2004, 18:12
was meinst du mit proteinexpression? Western Blot unter verschiedenen Bedingungen um nach einem bestimmten Protein zu suchen? Oder Analyse aller exprimierten Proteine?? :-))

trul
17.03.2004, 18:13
also :

ich hab DNA-fragmente,die ich in Vektoren klonieren muss.so das denn endlich mal fertig ist,müssen diese vektoren transformiert werden in kompetente zellen.
naja,und dann muss ich halt schauen,ob mir die zellen genau die proteinstücke exprimieren,die ich haben will.und dann auch die ganze nachweis-prozedur mit western blot und so.

test
17.03.2004, 18:27
Und so willst du rauskriegen ob eine bestimmte Zelle ein ganz bestimmtes Protein synthetisiert?? Das kann man doch auch einfacher. Woher nimmst du denn die DNA Stücke, die du in die Vektoren packst?

test
17.03.2004, 18:28
Oder gehts dir nur darum ne transfizierte Zelllinie zu bekommen, die ein gewünschtes Protein synthetisiert in großen Mengen zur Verwendung für andere Zwecke?

Dr. Wegschneider
17.03.2004, 18:49
Hi Trul,

viel Spass beim exprimieren. Hab so was auch versucht als Arbeit, mit aehnlichem Aufwand. Hab das ganze aber nach einem Jahr hingeschmissen, da ueberhaupt kein Land in Sicht war. Hab dann eine statistische Arbeit in meinem Wunschfach gemacht und diese nach jetzt einem Jahr auch fast fertig geschrieben.
Kann Dir aber einen Typ geben, wenn die Expression nicht funktioniert: Lass erstmal die DNA sequenzieren, die Du exprimieren willst. Die war bei mir schon defekt gewesen. Wenn dort ein Fehler ist, helfen alle tollen Expressionsmethoden nicht.

test
17.03.2004, 18:57
Transfektion hab ich auch mal gemacht allerdings mit nem fertigen Plasmid. Das ging ziemlich fiv ;-) Aber die DNA erstmal gewinnen in nen Plasmid einbauen usw... scheint schon ein deutlich größerer Aufwand zu sein.

trul
18.03.2004, 13:42
...hab eure beiträge gelesen.

die DNA-fragmente haben wir uns selber mit spezifischen primern zusammengebaut.
die stücke musste ich logischerweise auch sequenzieren.

ich hab halt jetzt ein problem damit,dass ich echt schon einen haufen zeit investiert hab-und das jetzt auch nicht so einfach über bord schmeissen will. :-dagegen
ich kann eben nur nicht abschätzen,ob das,was ich da bis jetzt gemacht hab,reicht,um es tatsächlich in eine dr.arbeit umzusetzen.
und den prof brauch ich gar nicht erst fragen,der will sowieso immernoch eine idee u noch eine idee verwirklicht haben.
er ist nicht wirklich mal offen u realistisch,ob die ergebnisse sich zu etwas vernünftigem zusammenfassen lassen würden...grrrrr
:-(

ich bräuchte einen unabhängigen wissenschaftler,der sich aber eben doch in diesem bereich auskennt.:-nix

DerBlinde
19.03.2004, 10:19
Ich mache seit Jahren Forschung und habe auch etliche Doktoranten gehabt/betreut. Schicke mir mal eine PM mit den Details, vielleicht kann ich Dir einen Tipp geben.
Gruß