B94 / A13, Tag 2 - PCR

Hallo mal wieder!

Ich poste mal direkt die Frage:

Ein kleines Genfragment soll mit Hilfe der Polymerasekettenreaktion vervielfältigt werden.

Welche der folgenden Schritte ermöglicht diese Reaktion?

(A) Aufschmelzen des DNA-Doppelstranges

(B) Zugabe von DNA-abhängiger RNA-Polymerase

(C) Anlagerung von Ribosomen

(D) Zugabe von Topoisomerasen

(E) Zugabe von Restriktionsendonukleasen

Laut Medi-Learn Antwort A, und sicherlich ist das Aufschmelzen nicht zu Verachten, aber ist nicht der große Trick bei der PCR das man bakterielle Endonukleasen zugibt?

Hoffe mich nicht verdacht zu haben....

Gruß, Timo

falsch, du meinst wohl die taq-polymerase....

das war leider nichts

A ist schon richtig

F

[Faust601]

Die Endonuklease würde dir dein Gen ja unter Umständen in Stücke schneiden und das wäre etwas kontraproduktiv.

[dlwow]

Ich bin auch eher für E,

denn man muss ja erst einmal Genfragmente herstellen (wie in der Frage angegeben), um sie anschließend zu schmelezen. Für die Fragmentherstellung braucht man zunächst also die Endonukleasen.

Gruß, Dominik

[test]

Es geht aber um die Vervielfältigung durch die Polymerasekettenreaktion und nicht um die Gewinnung von Genfragmenten. Das ist ja im Vortext bereits als vorhanden bezeichnet.

hinzu kommt, dass man eben KEINEN Restriktionsverdau durchführen muss. Die Länge des amplifizierten DNA-Abschnitts ergibt sich aus dem Primerdesign und primer "docken" genauso gern auch an kompletter genomischer DNA an. Die amplifiz. Sequenz ist dann natürlich nur ein "Fragment", welches weiter und weiter und weiter vervielfältigt wird...

[Ostseedirn]

Es ist ja gerade der Witz an der Sache, daß man keine Nukleasen braucht (weil spezifische Primer eingesetzt werden, die an einer bestimmten Stelle vor dem Gen binden und von diesem Startpunkt aus die Polymerase beginnt!!!) und eigentlich kann man alles andere ausschließen nachdem man A gelesen hat, denn aufschmelzen muß man die DNA in jedem Fall!!!

[Alles wird gut]

Original geschrieben von dlwow
Ich bin auch eher für E,

denn man muss ja erst einmal Genfragmente herstellen (wie in der Frage angegeben), um sie anschließend zu schmelezen. Für die Fragmentherstellung braucht man zunächst also die Endonukleasen.

Gruß, Dominik

Nä! Zum Schmelzen von DNA braucht's einzig und allein ca. 94°C und ein paar Minuten Zeit! Je länger die DNA, desto länger muss die initiale Schmelztemperatur gehalten werden. Dies ist (abgesehen von einer RT-PCR) IMMER der erste Schritt bei einer PCR!