PCR - machbar?

[Mäuschen]

Hallo,

wer von euch hat bereits Erfahrungen mit der PCR und kann mir ein paar Tipps geben? Ich werde demnächst eingearbeitet (normale PCR, später quantitative Real-Time PCR).

Ich freue mich auf eure Antworten.

[blanko]

Musst Du die PCR selber etablieren? Dann einfach genau achten auf Primerschmelzpunkte (insbesondere wenn unterschiedlich bei 2 verwendeten primern), MgCl-Anteil, am einfachsten (und teuersten) ist es ein Kit zu verwenden, ganz hilffreich ist manchmal der DMSO-Zusatz, schau ob die Polymerase einen Hot-Start benötigt. Wenn alles schon etabliert (und optimiert) ist, ist das ganze meist eher stupfsinnige Pipettiererei.

Quantitative PCR ist etwas komplexer und auch störanfälliger, läuft aber nach dem gleichen Prinzip. Je nach Gerät auch unterschiedlich. Hängt auch noch davon ab, ob Du absolute oder relative Werte willst. Sprengt hier ein wenig den Rahmen.

Wenn Du später konkrete Fragen hast, kannst Du mir auch mal ne PM schreiben.

blanko