Erfahrungsaustausch: Zellkultur

[Makrophage]

Hallo Leute,

einige Fragen:

- Habt Ihr schon einmal Erfahrungen mit Glutaminmangel in Zellkulturmedien gemacht? Ich arbeite zur Zeit mit einer Serie von DMEM w/Glut, die 11/05 abläuft. Ist es möglich, dass das Glutamin sich jetzt schon (also Oktober 05) so weit zersetzt hat, dass sich meine Zellen in einigen Versuchen abrunden und vom Untergrund ablösen?

- Hat jemand von Euch schon einmal mit PMA zur Zellstimulation gearbeitet?

- Arbeitet jemand von Euch auch schon länger im Labor und hat seine Frustrationstoleranz dermaßen überstrapaziert, dass ihm einfach die Worte fehlen?

Cheers

[MichaelHH]

Hallo!

Bei mir geht es demnächst wieder für ein halbes Jahr ins Labor... daher kann ich nur sagen: auf Regen folgt Sonnenschein (und leider auch wieder Regen)...

Mit dem Glutamat kann ich Dir leider nicht weiterhelfen...

Nächtlichen Gruß,

Michael

[lore]

zu frage eins kann dir vielleicht die kundenhotline von der dmem-firma was sagen? ich würde eher vermuten, daß es an den zellen liegt.

wie heißt pma mit vollem namen? was willst du denn dazu wissen?

jajajaja.

[test]

Ich hab zwar kein DMEM benutzt aber anderes Medium zu dem ich Glutamin, Pen/Strep Zusatz extra dazu getan habe und hatte irgendwie zu BEginn sehr große Probleme mit den Zellen, weil sie immer gestorben sind.
Habe dann einfach neues Glutamin und Pen Strep bestellt. Und erstaunlicherweise ging es dann. Ich weiß aber nicht mehr wie alt das Zeug war. Ich würde dir empfehlen mal probeweise neues MEdium zu bestellen und zu sehen obs dann geht, vielleicht war dein Batch irgendwie nicht in ORdnung. Wenns mit dem neuen gehen sollte, würde ich das der Firma auch sagen, oft sind die dann kulant und geben dir neues billiger oder umsonst.

[cand. med. Eule]

Hallo!
Ich hab für meine Kulturen RPMI-Medium verwendet mit Gluatamin-Zusatz. Das Glutamin war zum Zeitpunkt, wo ich es zum Medium hinzugefügt habe, auch schon recht alt, außerdem hab ich die Flasche mit dem Medium+Glutamat recht lange (mehrere Wochen) benutzt. Der Kulturansatz dauert zudem (hämatopoetische Stammzellen) auch 14 Tage ohne Austausch des Mediums. Ich hatte nie irgendwelche Probleme mit den Kulturen. Zugegeben der Ansatz von mir ist ein recht einfacher und unkritischer. Aber trotzdem: Ich glaub nicht, dass es bloß am Glutamin liegt (Außer irgendwer hat die Kühlkette unterbrochen!?! Wurde es denn auch vor dem Hinzufügen zum Medium schön bei -20°C gelagert?). Im Zweifelsfalle beides (Medium und Gluatmin) wegschmeißen und neu bestellen - Das sind nun wirklich keine großen Posten im Laboretat.
Liebe Grüße!

[Lava]

Ich selbst arbeite wenig mit Zellkulturen, aber ich weiß, dass in unserem Labor auch mal jemanden gab, der Probleme mit Glutamin im Zellmedium hatte. Scheinbar muss das wirklich so frisch wie möglich sein. :-nix

Auf Haltbarkeitsdaten gebe ich sowieso nicht mehr viel, da wir schon zweimal (!!!!!) den Fall hatten, dass ein Produkt von qb Perbio (Super Signal West) lange vor Ablauf des Haltbarkeitsdatums und trotz korrekter Lagerung seinen Geist aufgegeben hat. :-???

[el_corazón]

Mit welchen Zellen arbeitest du denn, von welcher Firma hast du das DMEM? Bist du sicher, dass es am Glutamin liegt? Vielleicht bräuchtest du noch nicht-essentielle Aminosäuren als Zusatz zum DMEM, ich muss die nämlich immer zusätzlich dazugeben...