Proteine konzentrieren

[Lava]

Hat jemand hier Erfahrung darin, Proteinlösungen mithilfe von solchen Membranen in Säulen (unsere nennen sich Vivaspin) zu konzentrieren? Man füllt die Lösung in eine Säule, zentrifugiert das Ganze, die Lösung wird durch eine Membran gedrückt, die Proteine bleiben hängen und man hat hinterher eine höhere Proteinkonzentration.

Ich habe das gestern mal ausprobiert mit einem Antikörper. Hinterher habe ich die Funktion des antikörpers in FACS überprüft und es sah nicht sehr schön aus. Ich habe den Verdacht, dass durch die hohen Fliehkräfte in der Zentrifuge der Antikörper in seiner Struktur geschädigt wird.

Hat jemand Erfahrung mit sowas? Kann ich das Problem minimieren, indem ich weniger g (z.B. 2000g statt 3750) benutze?

[supergirl17]

- um was für einen Ak handelt es sich?
- welche Pufferlösungen werden benutzt
- Pharmafirma fragen, die eure Säulen herstellt, ob die zu diesem Zwecke geeignet sind
-Pharmafirma fragen, die Säulen für diese Zwecke herstellt

Diese technical support hotlines sind meistens sehr hilfreich (hab's schon probiert :-)) )

Habe leider selbst keine Erfahrung mit der Aufreinigung von Ak, daher nur Allgemeinplätz als Lösungsvorschläge

[Bier]

Hallo,

ich habe während meiner Doktorarbeit mit Vivaspin-Säulen gearbeitet, um Viruslösungen aufzukonzentrieren. Es ist durchaus bekannt, dass durch die wirkenden Kräfte die Kapside zerstört werden können und damit der Titer sinken kann. Ich denke, ähnliches dürfte für Antikörper gelten.

Vivaspin-20-Säulen habe ich aus diesem Grund bei 2000g verwendet und einfach solange zentrifugiert, bis die gewünschte Volumenreduktion erreicht war. Aber Probieren geht über Studieren und ein Anruf bei der Firmenhotline kann auch nicht schaden...

Viele Grüße

[Ulle]

Hallo Janine

Eine Strukturschädigung durch die Beschleunigung während der Ultrazentrifugation kann ich mir nicht wirklich vorstellen, dafür sind die wirkenden Kräfte zu klein.

Wie supergirl17 schon meinte, braucht es wohl einiges mehr an Informationen, um Dir wirklich helfen zu können (Konnte der AK vorher erfolgreich im Zytometer eingesetzt werden? Was für Puffer wurden benutzt? Wie sieht der AK im Coomassie-Gel aus?).

Meiner Meinung nach ist auch dieses Forum für die Fragestellung nicht wirklich optimal, hier geht es doch eher um den Medizineralltag, wesentlich mehr und besseres Feedback zu methodischen Fragestellungen bekommst Du aus meiner Erfahrung hier (http://www.chemieonline.de/forum/index.php) (für diese Frage Biologie und Biochemie, da hängen die ganzen Biochemiker und Molekularbiologen ab, wenn sie auf Inkubationszeiten warten...:-sleppy).

Gruss, Ulle

[supergirl17]

Hi Ulle,

danke für den Link.
Dann weiß ich ja auch, wo ich demnächst inkubieren werde :-)

[Lava]

Hab mal unsere alte MTA gefragt und sie hat Erfahrung damit, Antikörper in den Teilen zu zentrifugieren. Sie hat damals nur 1500g eingesetzt, also werd ich das mal ausprobieren. :-)

[Michi5880]

EDIT:

Ups... aus lauter Rage vertippt und im falschen Thread gepostet... :-oopss