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Archiv verlassen und diese Seite im Standarddesign anzeigen : Lineage depletion



christo
17.03.2007, 12:21
Hat jemand von euch sowas schon gemacht? Durchlußzytometrie bzw. magnetic labeling?
Bzw. Hat jemand von euch Erfahrungen mit dem Sorten bei der Durchflußzytometrie bezüglich der Reinheit?

Gruß

He-Man
18.03.2007, 18:22
Für die Diss muß ich macsen und facsen, sortiert habe ich aber noch nicht. Worum geht es denn?

christo
18.03.2007, 18:43
Macsen? Meinst du mit dem Magneten? Genau dazu bräucht ich nämlich ein paar Infos. Wie hoch ist die Reinheit bei den aufgereinigten Zellen bei dir?

He-Man
18.03.2007, 21:51
Mittels positiver Markierung lag die Reinheit bei meiner letzten Kontrolle bei 95% (jeweils nach CD4+, CD8+ und CD19+-Zellen gemacst). Auf der Seite von Miltenyi gibt es auch Beispiel-dot-plots.

christo
19.03.2007, 13:10
Hmm. Danke erstmal. Warum komm ich dann nur auf 60% Hatten nen Vertreter von Miltenyl schon da aber er meint es leigt an den Einstellungen vom FACS.

He-Man
19.03.2007, 21:09
Reinheit vor Sortierung nehme ich jetzt mal an. Du kannst die Zellen vorher noch einmal über eine neue Säule schicken; falls es nicht am Facs liegt, müßte damit die Reinheit erhöht werden können. Welche Beads benutzt Du denn? Bei unspezifischen Oberflächenantigenen ist die Reinheit natürlich von vornherein nicht so hoch.
Warum genau sollte es denn an den Facs-Einstellungen liegen? Oder meinte er die Auswertung?

christo
19.03.2007, 22:17
Also: Wir brauchen murine lineage-negative Zellen. Nach der Depletion über die Säule haben wir immer noch enorm (40%) viele Biotin-positive Zellen bei der FACS-Analyse. Was ja eigentlich nicht sein sollte da die Beads ja an den Lineage-Biotin-Cocktail binden. Da wir eh schon recht wenig Zellen haben fällt ein zweiter Lauf über die Säule flach, zudem müssen wir ohnehin nochmal über die Säule, allerdings für c-kit positive Zellen.

He-Man
19.03.2007, 23:29
Längere Inkubation/geringeres Färbevolumen habt ihr sicherlich schon probiert, oder? Mehr fällt mir dazu im Moment leider auch nicht ein...