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Archiv verlassen und diese Seite im Standarddesign anzeigen : Patch- Clamp



Mirona
15.06.2007, 21:04
Hei,

ich suche etwas ganz spezielles und finde nichts gescheites.......... ;-)
Falls ihr irgendetwas über mögliche Störungen bzw. Fehlerquellen bei der Patch- Clamp Mesung wisst, lasst es mich wissen........... :-winky
Informationen über mögliche Quellen für meinen gesuchten Stoff werden ebenfalls dankend angenommen.......... :-angel

Grüßle, Mirona

Duncan84
16.06.2007, 00:01
Ich weiß wenig dazu, nur soviel. Erfunden hats der Sackmann (btw Nobelpreis dafür) und der ist im Moment der Leiter des Max-Planck-Instituts in Heidelberg, vl findest du ja da was. Mögliche Fehlerquelle, die mir so spontan einfällt: die Membran ist nicht ganz dicht an die Nadel angelegt. Mehr weiß ich dazu aber auch nicht.
Wenn du was in nem Buch dazu findest, dann am ehesten in nem dicken Physiobuch.

Evil
16.06.2007, 20:23
Meine Dissertation bestand hauptsächlich aus Patch-Clamp-Messungen, da hab ich in 5 Jahren viele z.T. frustrane Erfahrungen gemacht, vielleicht kann ich Dir weiterhelfen (gern auch per PN).

Was ist das Problem? :-)

Kieler Sprotte
17.06.2007, 09:21
Ich weiß wenig dazu, nur soviel. Erfunden hats der Sackmann (btw Nobelpreis dafür) und der ist im Moment der Leiter des Max-Planck-Instituts in Heidelberg


Du solltest Herrn Neher nicht vergessen, er hat zusammen mit Sackmann die Patch-Clamp-Technik revolutioniert. Jahre später haben beide dann den Nobelpreis bekommen (1991 Nobelpreis für Medizin)!!! :-D

Mirona
19.06.2007, 20:48
Bin gerade beim Zusammenschreiben und würde gerne in meine Diskussion um diesselbige etwas zu strecken........ :-D :-) eine Fehlerdiskussion zu Patch Clamp reinbasteln....;O)
An Fehlermöglichkeiten habe ich : Störungen, durch die elektrischen Ströme anderer Geräte, Beschädigung der Beschichtung der Silberdrahtelektrode, Verstopfung der Elektrodenspitze.............
Also, falls ihr @evil noch ein paar andere Fehlerquellen wisst, lasst es mich wissen............;O)
Bin auch Literaturlinks nicht abgeneigt...... :-lesen

Grüßle und danke, Mirona

Linda.1001
19.06.2007, 20:58
Bin gerade beim Zusammenschreiben und würde gerne in meine Diskussion um diesselbige etwas zu strecken........ :-D :-) eine Fehlerdiskussion zu Patch Clamp reinbasteln....;O)
An Fehlermöglichkeiten habe ich : Störungen, durch die elektrischen Ströme anderer Geräte, Beschädigung der Beschichtung der Silberdrahtelektrode, Verstopfung der Elektrodenspitze.............
Also, falls ihr @evil noch ein paar andere Fehlerquellen wisst, lasst es mich wissen............;O)
Bin auch Literaturlinks nicht abgeneigt...... :-lesen

Grüßle und danke, Mirona
Hi Miri,

wenn ich in der Praxis bin und nen EKG schreibe und die Mirkowellen-Therapie nebenan an ist, dann ist das auch nen Fehler, den man aufm EKG Streifen sieht, genauso ists mit Handys.

Evil
19.06.2007, 21:09
Bin gerade beim Zusammenschreiben und würde gerne in meine Diskussion um diesselbige etwas zu strecken........ :-D :-) eine Fehlerdiskussion zu Patch Clamp reinbasteln....;O)
An Fehlermöglichkeiten habe ich : Störungen, durch die elektrischen Ströme anderer Geräte, Beschädigung der Beschichtung der Silberdrahtelektrode, Verstopfung der Elektrodenspitze.............
Also, falls ihr @evil noch ein paar andere Fehlerquellen wisst, lasst es mich wissen............;O)
Bin auch Literaturlinks nicht abgeneigt...... :-lesen

Grüßle und danke, Mirona
Oh, da gibt es jede Menge:
- unzureichende Erdung/Abschirmung des Meßstandes
- mangelnde Dämpfung (es geht jemand vorbei und BUMM, Zelle is platt)
- zu hoher oder zu niedriger Widerstand der Pipetten = zu große oder zu kleine Öffnung der Pipettenspitze = der Puller ist hinüber
- das Ansaugsystem ist defekt = Du kriegst keinen Giga-Seal
- wenn Du eine schnelle Perfusion für Medikamentengabe hast, kann die natürlich auch defekt sein
- je nach Patch-Technik (whole-cell, inside-out, outside-out) kann auch da noch mehr schiefgehen

Dann gibt es natürlich noch die Protokolle für die Haltespannung, die Zusammensetzung der Badlösung, beides eine Wissenschaft für sich... und alles hängt dann auch noch von der Zellkultur ab, was Du für Zellen mißt, die Präparation, blablabla :-D

Zähl lieber nur auf, was funktionieren sollte ;-)

Als Literaturtip kann ich empfehlen:
M. Numberger, A. Draguhn
"Patch-Clamp-Technik"
Spektrum Verlag

Linda.1001
19.06.2007, 23:19
Hi Miri,

wenn ich in der Praxis bin und nen EKG schreibe und die Mirkowellen-Therapie nebenan an ist, dann ist das auch nen Fehler, den man aufm EKG Streifen sieht, genauso ists mit Handys.
Hoppala, ich glaube ich habs falsch verstanden, sorry!

Nemesisthe2nd
19.06.2007, 23:41
verstopfte elektrodenspitze durch kristallisation der KCl lösung in der elektrode... passiert wenn man sie schon befüllt zu lange liegen lässt...


aber ich glaub mit evil's tipps fährst du viel besser...


aber mal allgemein zum patch-clamp... findet ihr es empfehlenswert sich als dissertation mittels patch-clamp auf nen kanal zu stürzen? wie sind die erfolgsaussichten, das hinterher auch was bei rum kommt, außer "ähh funktioniert alles irgendwie nicht..."
(ich weiß das hängt sicher auch von der betreuung, dem zu untersuchenden kanal usw ab...)

wie lange habt ihr gebraucht um die technik zu erlernen? ich hab bisher nur 2 wochen 2-elektroden voltage-clamp mit xenopus-oocyten in einem zusatz-praktikum gemacht... das lief eigentlich einigermaßen, aber das eine mal patch clamp auf nem rattenhirn präperat fand ich schon wesentlich schwieriger... (ein doktorant hat es uns mal kurz probieren lassen... irgendwie war das elektroden platzieren mit dem elektronischen mikromanipulator schon echt friemelig... vor allem da man im mikroskop ja nur eine ebene scharf kriegt.. ich fands ziemlich schwer mich von der elektrodenposition her zu orientieren...)

Evil
20.06.2007, 06:57
Es IST auch nicht so einfach, aber wie fast alles reine Übungssache. Wenn Du 1x die Woche ein paar Stunden übst, bist Du wahrscheinlich nach 1-2 Monaten recht fit. Allerdings kommt es dabei auch auf die Zellart an: die Xenopus-Dinger sind nahezu unkaputtbar, wogegen z.B. CHO-Zellen auch erfahrene Patcher in den Wahnsinn treiben können... meine Ratten-Cardiomyozyten waren so mittelmäßiger Schwierigkeitsgrad.

Vom Zeitaufwand her würde ich bei einer Patch-Clamp-Diss mindestens 2 Jahre veranschlagen, es ist ja auch immer Grundlagenforschung. Aber selbst wenn keine eindeutigen Ergebnisse herauskommen, kann man sich eine Diss zusammenbasteln... so wie ich :-D
Kann zeitweise sehr frustrierend sein; wenn Dir das Thema großen Spaß macht und Du sehr hartnäckig bist, probier es aus. Allen anderen würde ich empfehlen, macht was weniger Aufwendiges... ich würd's jedenfalls nicht noch einmal machen.