FACS WASCHUNG

[Dr. Sziget]

Hallo zusammen,
sicherlich kann mir jemand von euch weiterhelfen. Wir funktioniert denn eine FACS Waschung mittels FACS-Puffer (nicht FACS-Lyse) genau ? Was geht hierbei vor sich und warum funktioniert diese Waschung ?

Wäre toll, wenn mir jemand weiterhelfen würde...


Liebe GRüße

Dr.Sziget

[christo]

Bin mir jetzt nicht genau sicher was du meinst?
Waschen der Zellen nach AK-zugabe?

[Dr. Sziget]

pardon, für die etwas ungenaue Formulierung. Ja genau, es geht mir um den letzten Waschschritt vor der Messung. Waschung der Zellen nach stattgehabter Antikörpergabe und Inkubation....


Danke

Dr.SZiget

[cKone]

Normalerweise wäscht man die Zellen nach der AK-Färbung mittels Serum-haltigem PBS. Das Serum bindet die freien AK, die ja noch in deiner Zellsuspension enthalten sind und die FACS-Messung theoretisch stören könnten.
Wenn du das Medium nach Zentrifugation dann dekantierst, dürften nahezu alle ungebundenen bzw. Serum-gebundenen AK entfernt sein, lediglich die Zell-gebundenen AK sind jetzt noch in deiner Suspension enthalten.

[christo]

Den Facs-Puffer als solches kenn ich auch nicht.
Grundsätzlich gibt es für die meisten AKs recht gute Anleitungen der Hersteller, zusätzlich findest du viel in Veröffentlichungen bzw Doktorarbeiten.
Ich z.B. benutze statt Serum BSA.
Bei vielen AKs ist der letzte Waschschritt gar nicht nötig (meine Erfahrung beispielsweise mit Annexin-Fitc und PI zur Apoptosemarkierung).