andre1983
01.07.2008, 20:41
Vielleicht etwas speziell die Fragen, aber:
ich will meine Monozyten mit verschiedenen TLR-Liganden stimulieren, benutze
- poly(I:C)
- Peptidoglycan
- Loxoribine
- Muramyl Dipeptide
- alle von Sigma bestellt
- ich benutze humane PBMCs (isoliere diese durch Ficoll aus EDTA-Blut) und gebe diese auf eine 24 oder 96 Well-Platte. Ich lasse dann die Monozyten adhärieren und wasche nach ca. 2-3h alle anderen Zellen weg.
Das mit den ausdifferenzierten Zellen ist etwas schwieriger:
- ich habe schon beides versucht - die Zellen nach 24 bis 48h über Nacht stimuliert bzw. 6h
- M-CSF dazugegeben und die Zellen zu Makrophagen ausdifferenzieren lassen und dann stimuliert
- ich bestimme nur die Zellzahl der dazugegebenen PBMCs mittels Zählkammer
Ich messe nach der Stimulation TNF-A mittels Elisa von BD, leider sind sind Konzentrationen teilweise sehr gering.
Kennt sich jemand aus bzw. kennt eine Publikation mit humanen Monozyten?
Für Hilfe wäre ich sehr dankbar,
André
ich will meine Monozyten mit verschiedenen TLR-Liganden stimulieren, benutze
- poly(I:C)
- Peptidoglycan
- Loxoribine
- Muramyl Dipeptide
- alle von Sigma bestellt
- ich benutze humane PBMCs (isoliere diese durch Ficoll aus EDTA-Blut) und gebe diese auf eine 24 oder 96 Well-Platte. Ich lasse dann die Monozyten adhärieren und wasche nach ca. 2-3h alle anderen Zellen weg.
Das mit den ausdifferenzierten Zellen ist etwas schwieriger:
- ich habe schon beides versucht - die Zellen nach 24 bis 48h über Nacht stimuliert bzw. 6h
- M-CSF dazugegeben und die Zellen zu Makrophagen ausdifferenzieren lassen und dann stimuliert
- ich bestimme nur die Zellzahl der dazugegebenen PBMCs mittels Zählkammer
Ich messe nach der Stimulation TNF-A mittels Elisa von BD, leider sind sind Konzentrationen teilweise sehr gering.
Kennt sich jemand aus bzw. kennt eine Publikation mit humanen Monozyten?
Für Hilfe wäre ich sehr dankbar,
André