Ficoll und Buffy Coats

[Lava]

Hat hier jemand schon mal aus Buffy Coats Monos mit Ficoll aufgereinigt? Wäre für Tipps und Hinweise aller Art dankbar...

[tigerlilly2005]

also ich hab das eher anders herum gemacht. habe km-proben bekommen und mit ficoll die leukozyten heraus gefiltert. denn der dichte gradient von der ficoll lösung trennt dir erys und serum ab und läßt die leukozyten übrig. um dann aus den leukos nur die monos zu bekommen mußte ich facs analyse machen

[Lava]

Hmm... normalerweise reinigen hier einige im Labor Monos aus Vollblut auf mit Ficoll. Da wir aber zur Zeit Unmengen an Monos brauchen und nicht jede Woche 100ml oder mehr Blut spenden wollen, versuchen wir's mit Buffy Coats aus der Transfusionsmedizin. Im Augenblick machen wir gerade den zweiten Versuch damit. Das Problem heute war, dass sich die Erys nicht so schön von den Leukos haben trennen lassen und beim Abpipettieren der Leukoschicht wurden leider auch massig Erys miteingesogen. Mittlerweile haben wir das Zeug noch ein paar mal zentrifugiert und glücklicherweise gibt's irgendwann mal einen Schritt, wo die Monos im Überstand und die Erys im Pellet sind (WIE das sein kann, weiß keiner so richtig...). Jetzt gleich zählen wir sie aus, dann werden wir ja sehen, ob's funktioniert hat.
Ein FACS haben wir zwar, aber keinen Cell Sorter. Sowas braucht man ja zum Sortieren, richtig? Was hast du eigentlich mit den Monos gemacht, wenn ich fragen darf?

[Dedi]

Ich hab neulich auch aus Vollblut die PBMC mit Ficoll isoliert. Die Schichten haben sich nach dem Zentrifugieren wunderbar abgetrennt, ich hab die Zellen dann gewaschen, in RPMI Medium aufgenommen und verschickt. Leider kamen die Zellen tot an. Ich kann mir aber nicht vorstellen, was ich falsch gemacht habe. Das einzige was ich mir vorstellen kann: dass die armen Zellen die Temperaturunterschiede draussen nicht gepackt haben. Oder habt ihr eine andere Idee? Was kann man da falsch machen???

[Lava]

*lol* Und gerade heute hat unsere TA erzählt, dass irgendjemand aus unserem Labor Zellen nach Australien (!!!!) geschickt hat und sie lebend angekommen sind...
Ich nehme an, Zellen sind unterschiedlich empfindlich. Manche vertragen sowas, andere vielleicht nicht.