Western Blot

[Minoo]

beschäftige mich gerade mit oben genanntem Thema und dabei ist ein VerständnisProblem aufgetreten.
Das Verfahren des Übertragens, also dem Blot, habe ich verstanden. Jetzt hakt es aber bei den anschließenden immunspezifischen Reaktionen.
Man kann ja auf den fertigen Blot Anitikörper geben, um spezifische Nachweisreaktionen der Proteien durchzuführen. Dabei binden Protein und Ak, sofern sie passen. Ich frage mich aber, warum die Ak's nur an den Proteinen und nicht auch mit H-Brückenbindungen an der Membran binden sollten? Dann wäre die ganze Reaktion nicht mehr spezifisch.
Kann mir wer weiterhelfen?

[Gesocks]

Stimmt absolut; deshalb "blockt" man die Membran nach dem Elektroblot bzw. vor der Inkubation mit dem Antikörper mit einem neutralen Protein, indem man sie in einer Lösung von z.B. Rinderalbumin sättigt.

[Minoo]

ahhh so. Cool, da hab ich ja mal klug um die Ecke gedacht. Dann dürfen die Ak's aber auch nicht an Albumin binden. Ich habe nochmal weitergelesen und bin dabei über northern und eastern blot gestoßen. Ist das nur eine Weiterentwicklung und für nen Pharmazeuten noch wichtig zu wissen? Will mich schließlich nicht in die tiefsten biochemischen Gefilde einarbeiten. Ist so schon genug...

[Gesocks]

Genau, wollte man Albumin im Western Blot nachweisen müsste man irgendein anderes Protein zum Blocken benutzen.
Eastern Blotting beschreibt unterschiedliche Verfahren zum Nachweis posttranslationaler Modifikationen. Dann gibt's noch Far-Western Blotting, bei dem man ein Protein, das kein Antikörper ist, zum Nachweisen verwendet (z.B. um mögliche in vitro Interaktionen nachzuweisen).
Northern und Southern Blot sind Verfahren zum Nachweis spezifischer DNA (Southern) und RNA (Northern).

Da gibt's aber insgesamt noch einige mehr (Southwestern, Middle Eastern, ...).

[Minoo]

jo danke...okay ich sehe, da öffnet sich ein ganzes Blotting-Fass. Woher weißt du das, also ich meine, war das bei dir im Studium relevant?